支原體污染解決方案

支原體是一種類似細(xì)菌但不具有細(xì)胞壁的原核微生物，直徑在 50-300 nm，可輕松通過一般濾膜（0.22 μm）混入培養(yǎng)系統(tǒng)中，普通的抗生素（如培養(yǎng)細(xì)胞常用的雙抗）對(duì)它不起作用。支原體以寄生和共生方式存活，部分可能導(dǎo)致動(dòng)物、植物宿主的病變。

支原體是細(xì)胞污染物中比較常見的一種，來源廣泛，常見的主要來自培養(yǎng)試劑、人員操作、細(xì)胞間交叉污染及組織來源。受支原體污染的細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)變慢，狀態(tài)會(huì)變差，雖不會(huì)馬上使細(xì)胞致死，但卻會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的各種參數(shù)，如改變細(xì)胞膜抗原性，改變細(xì)胞新陳代謝，干擾核酸的合成，改變 DNA 轉(zhuǎn)染效率，導(dǎo)致染色體畸變等，這些影響會(huì)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，重復(fù)性差，甚至得出錯(cuò)誤的結(jié)論。2013年業(yè)界頂級(jí)期刊《Nature》已正式要求投稿的文章如涉及細(xì)胞培養(yǎng)，都必須要進(jìn)行支原體檢測(cè)。此外，支原體污染檢測(cè)也是生物藥研發(fā)與生產(chǎn)的重要質(zhì)控指標(biāo)，必須在生物藥產(chǎn)品開發(fā)的各個(gè)階段進(jìn)行，包括原材料、細(xì)胞庫(kù)、病毒種子庫(kù)、未加工的收獲液材料和最終產(chǎn)品。

常見的支原體檢測(cè)方法

支原體不僅僅會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)，在實(shí)驗(yàn)過程中受污染的支原體會(huì)成為感染源可以感染其它細(xì)胞，因此支原體的去除與預(yù)防也至關(guān)重要。全式金推出快速、高效的支原體檢測(cè)試劑，高去除率、低毒性的去除試劑及使用方便、可替代雙抗的預(yù)防試劑，全方位助力消除支原體污染。

支原體檢測(cè)

TransDetect^? PCR Mycoplasma Detection Kit

本產(chǎn)品通過 PCR 方法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞等生物材料中的支原體，針對(duì)支原體 16S rRNA 序列保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異引物，直接使用細(xì)胞培養(yǎng)液作為模板，特異性擴(kuò)增支原體 DNA，具有操作簡(jiǎn)便、快速（2 小時(shí)內(nèi)即可出結(jié)果）、 特異性強(qiáng)、靈敏度高的特點(diǎn)。

? 靈敏度高，可檢測(cè)到低至 20 個(gè)拷貝的支原體 DNA。

? 特異性強(qiáng)，只擴(kuò)增支原體 DNA，真核細(xì)胞和細(xì)菌 DNA 不被擴(kuò)增。

? 操作簡(jiǎn)便，無需提取基因組 DNA，適合大量細(xì)胞樣品的檢測(cè)。

? 配有陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照，保證 PCR 檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

TransDetect^? Luciferase Mycoplasma Detection Kit

本產(chǎn)品利用支原體中所特有的酶設(shè)計(jì)而成，該酶分解 MycoDetect Substrate 的同時(shí)將 ADP 轉(zhuǎn)換成ATP，熒光素酶在 ATP 存在的條件下催化熒光素（luciferin）氧化發(fā)出生物熒光，通過檢測(cè)生物熒光可 以表征細(xì)胞培養(yǎng)物是否存在支原體污染。由于檢測(cè)的是真正具有生物活性的支原體，所以得到的結(jié)果 比 PCR 檢測(cè)方法更加準(zhǔn)確。該方法靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)。

TransDetect^? qPCR Mycoplasma Detection Kit

本產(chǎn)品采用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)支原體DNA，用于定性檢測(cè)如培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)物、生物制品等樣品中的支原體污染。可檢測(cè)的支原體種類涵蓋范圍廣，包括柔膜菌綱（Mollicutes）下的多種支原體（Mycoplasma spp.）、無膽甾原體（Acholeplasma spp.）、螺原體（Spiroplasma spp.）等。本試劑盒按照EP 2.6.7和JP G3支原體檢測(cè)相關(guān)指南和要求進(jìn)行驗(yàn)證。? 支原體種類覆蓋范圍廣：已驗(yàn)證13 株菌株及質(zhì)粒DNA 的支原體檢測(cè)，數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)可覆蓋至少129 種支原體DNA 序列。

? 靈敏度高：驗(yàn)證的支原體滿足95% 的檢出要求，檢測(cè)限可達(dá)10 CFU/mL；質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品可達(dá)1 copy/μL。

? 特異性高：常見的近20 種細(xì)菌、生產(chǎn)用細(xì)胞等基因組無檢測(cè)干擾。

? 穩(wěn)定性高：產(chǎn)品至少可凍融15 次，產(chǎn)品性能無明顯影響。

? dUTP/UDG 防污染系統(tǒng)：有效防止PCR 產(chǎn)物的污染，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。

? 儀器兼容性廣：主流qPCR 檢測(cè)儀器均可兼容，檢測(cè)結(jié)果一致。

靈敏度高

10 種10 CFU/mL 支原體標(biāo)準(zhǔn)株DNA 的擴(kuò)增結(jié)果顯示，TransGen 產(chǎn)品在檢出限10 CFU/mL 濃度下，檢出率可達(dá)到100%。（擴(kuò)增圖是發(fā)酵支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果展示）

特異性高

以上物種基因組DNA 的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性，表明TransGen 產(chǎn)品特異性高，與非支原體物種無交叉反應(yīng)。

耐用性高

分別用以上基質(zhì)稀釋陽(yáng)性支原體懸液，對(duì)照基質(zhì)為無核酸酶水，DNA 提取后進(jìn)行qPCR 檢測(cè)。結(jié)果表明，各基質(zhì)組的Ct 值與對(duì)照接近， Ct 值滯后不超過0.6，上述基質(zhì)對(duì)支原體檢測(cè)無明顯影響。

支原體去除

 TransSafe^TM Mycoplasma Elimination Reagent (TransMyco Plus) Kit

本產(chǎn)品包含兩類抗生素組分，第一類抗生素干擾支原體的蛋白表達(dá)，第二類抗生素干擾支原體的 DNA復(fù)制，從而可以有效去除支原體污染。本產(chǎn)品對(duì)真核細(xì)胞干擾小，細(xì)胞毒性低，可以保持較高的細(xì)胞活率。

? 支原體清除效率高。

? 使用濃度低，細(xì)胞毒性小，適用細(xì)胞種類廣。

? 使用方便，直接加入培養(yǎng)基中即可。

支原體預(yù)防

TransSafe^TM?Mycoplasma Prevention Reagent

本產(chǎn)品是對(duì)支原體具有抑制作用的三種抗生素的混合物，分別為大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類和氟喹諾酮類衍生物抗生素，可以有效干擾支原體的蛋白表達(dá)和DNA復(fù)制。

? 支原體預(yù)防效果好，可以最大程度地避免支原體污染。

? 使用濃度低，細(xì)胞毒性小，適用細(xì)胞種類廣。

? 使用方便，直接加入培養(yǎng)基中即可。

? 抗性范圍廣，可替代雙抗預(yù)防常見的革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌。

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