助力霍亂檢測
近日，武漢大學通報出現(xiàn)一例確診霍亂病例，由于霍亂是甲級傳染病，所以該病例引起了廣泛關注。武漢市武昌區(qū)衛(wèi)生健康局7月11日公布后續(xù)情況：患者經有效診治病情已得到控制，癥狀也已消失。目前未發(fā)現(xiàn)新增病例。
然而一波未平、一波又起！
7月13日，在武漢洪山區(qū)白沙洲市場水產品中檢出4份甲魚樣本霍亂弧菌陽性(O139群)。洪山區(qū)迅速啟動應急響應，開展流調溯源、排查管控、環(huán)境采樣、終末消殺等處置工作。值得欣慰的是本次檢出的霍亂孤菌尚未引發(fā)人員感染。
在很多人的印象里，霍亂是一種古老且遙遠的疾病。實際上在全球范圍內，霍亂的威脅一直存在。對于霍亂，我們不必恐慌，但需要時刻警惕傳染病風險。
霍亂弧菌
霍亂，是由霍亂弧菌引起的一種急性腸道傳染病，以發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣為特征，為我國甲類傳染病，也是國際檢疫傳染病。2018年，也門經歷了歷史上最嚴重的霍亂疫情，同時，非洲一些國家也創(chuàng)下了該病死亡率的最高記錄。WHO專家估計，在世界范圍內每年大約有130萬至400萬例霍亂，導致2.1-14.3萬人死亡。
霍亂弧菌屬于弧菌科，革蘭氏陰性菌，菌體短小呈逗點狀，有單鞭毛、菌毛，部分有莢膜。WHO腹瀉控制中心根據霍亂弧菌的菌體抗原特異性、生物性狀、致病性等不同，將其分為了3型，即O1 群霍亂弧菌、非 O1 群霍亂弧菌、不典型 O1 群霍亂弧菌。目前霍亂血清群已超過200種，其中只有血清群O1和O139可以引起霍亂。
霍亂第七次大流行
從有記載的霍亂暴發(fā)流行至今，霍亂已引起了七次世界大流行，且每次均從亞洲開始，再擴散到其它大陸并延續(xù)多年。
目前全球范圍內正在經歷第七次世界大流行，此次大流行由埃爾托生物型霍亂弧菌引起，始于1961年的印度尼西亞，隨即傳遍了東南亞及西太平洋海域的大多數(shù)國家和地區(qū)。1964年后，霍亂已經傳播到了亞洲內陸國家和地區(qū)，1970年傳入非洲和歐洲，1973年傳入北美洲，1974年傳入大洋洲，1991年傳入拉丁美洲，從而遍及全球五大洲。
霍亂傳播途徑
患者及帶菌者是霍亂的主要傳染源，通過飲用或食用被霍亂弧菌污染的水或食物，接觸霍亂病人、帶菌者排泄物污染的手和物品以及食用經蒼蠅污染過的食物等途徑傳播。
霍亂臨床癥狀
根據《全國霍亂監(jiān)測方案》，凡有腹瀉癥狀，且糞便、嘔吐物或肛拭子樣品培養(yǎng)O1群或（和）O139群霍亂弧菌陽性者，可為實驗室確診病例。根據臨床表現(xiàn)，霍亂病程大致可分為3期。
● 瀉吐期
患者每日大便次數(shù)可達數(shù)次至十幾次，糞便的性狀也會變成水樣便，同時可能噴射性嘔吐。
● 脫水期
由于劇烈腹瀉及嘔吐，患者體內水分和電解質丟失嚴重。此時血容量下降可導致循環(huán)衰竭，患者有休克死亡風險。
● 恢復期
糾正脫水后，大多數(shù)患者癥狀消失，逐漸恢復正常。部分患者可出現(xiàn)發(fā)熱性反應，一般持續(xù)1-3天后自行消退。
霍亂檢測方法
目前用于霍亂弧菌檢測的方法主要有微生物學方法、分子生物學方法和免疫學方法，與微生物學方法相比，分子生物學方法應用越來越廣泛。
● 微生物學檢測方法
● 分子生物學檢測方法
● 免疫學檢測方法
全式金作為國內優(yōu)質分子診斷原料供應商，擁有16年分子生物學產品研發(fā)經驗，深耕分子酶領域，可提供從霍亂孤菌核酸提取到檢測所需的核心原料，助力霍亂孤菌分子診斷產品的研發(fā)。
產品推薦
核酸提取
EasyPure? Bacteria Genomic DNA Kit（EE161）
? 裂解能力強
? 提取速度快
? 提取量高（高達20 μg）
? 純度高，離心柱高效、特異吸附DNA，有效去除蛋白質、鹽類等雜質。
核酸檢測
適用于以DNA為模板的LAMP擴增反應，擴增能力強、特異性高，在熒光定量法（染料法、探針法）LAMP反應中具有良好的反應性能。
? 操作簡單：包含反應所需組分，只需自備模板及引物探針即可；
? 高效率：強鏈置換及聚合酶活性，實現(xiàn)恒溫條件下快速、高效、特異性的LAMP擴增；
? 操作可視化：擴增結果可通過肉眼觀察進行判讀；
? 兼容dUTP/UDG：對dUTP耐受性好，添加dUTP/UDG有效防止LAMP產物污染，數(shù)據準確。
擴增靈敏度高
以不同濃度的番鴨細小病毒（MDPV）質粒為模板，使用TransGen產品進行LAMP擴增。結果表明，TransGen產品擴增靈敏性高，特異性好，檢出限可達fg級別。
注：1*102 copies濃度為fg級別
擴增速率快
在同等模板濃度條件下，分別使用TransGen產品和Company N產品進行LAMP擴增。結果表明，TransGen產品擴增速率更快。
反應可視化
以非洲豬瘟病毒（ASFV）p72基因質粒為模板，使用TransGen產品進行濁度法、HNB、中性紅顯色法LAMP擴增檢測，63 ℃反應30 min。結果表明TransGen產品可進行可視化操作，擴增結果均可通過肉眼觀察進行判讀。
PerfectStart? II Probe qPCR SuperMix UDG (AQ712)
在PCR體系中加入熒光探針，通過檢測熒光信號測定樣本核酸量，其組分中含有PerfectStart? Taq熱啟動酶及特殊優(yōu)化的反應緩沖液，可更加高效、精準完成qPCR檢測。
? 3種抗體封閉，特異性高，靈敏度高，擴增效率高；
? 特殊優(yōu)化的qPCR反應緩沖液，可提供更高的靈敏度和特異性；
? 使用UDG酶和dUTP，有效防止PCR產物污染，數(shù)據準確；
? 適用范圍廣，已成功用于非洲豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、哈維氏弧菌、蝦肝腸胞蟲和副溶血性弧菌等檢測；
? 穩(wěn)定性好，在反復凍融、預混液、常溫、37℃等條件下保存，均可穩(wěn)定擴增。
多重PCR檢測
以牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）cDNA、豬藍耳病病毒（PRRSV）cDNA、非洲豬瘟病毒（ASFV）質粒、偽狂犬病病毒（PRV）gDNA混合物為模板，進行qPCR檢測。結果表明，TransGen產品可進行4重檢測。
高靈敏度、高擴增效率
分別以不同濃度豬藍耳病病毒（PRRSV）（10 pg、0.1 pg、0.01 pg）和牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）（100 pg、1 pg、0.1 pg）的cDNA為模板，使用TransGen、Company V、Company T產品進行qPCR檢測。結果表明，TransGen產品靈敏度可達0.1 pg，擴增效果優(yōu)于Company V與Company T。
穩(wěn)定性好
批次穩(wěn)定性
使用不同批次的TransGen產品進行單重和四重qPCR檢測。結果表明，TransGen產品可保障穩(wěn)定的批次重復性。
凍融穩(wěn)定性
使用0、5、10、15、20次反復凍融保存處理后的TransGen產品進行單重和四重qPCR檢測。結果表明，反復凍融后TransGen產品性能不受影響，仍可穩(wěn)定擴增。
預混穩(wěn)定性
將一重、二重和三重檢測基因的引物探針與TransGen產品進行預混，并在不同溫度保存7天后進行qPCR檢測。結果表明，TransGen預混液在不同溫度保存后仍可穩(wěn)定擴增。
參考文獻
1.Diagnostic techniques for rapid detection of Vibrio cholerae O1/O139[J]. Vaccine,2020.
2.Epidemiology of cholera[J]. Vaccine,2020.
3.Epidemiology, Genetics, and Ecology of ToxigenicVibrio?cholerae[J]. Microbiology and Molecular Biology Reviews,1998.
4.Molecular Ecology of Toxigenic?Vibrio?cholerae[J]. Microbiology and immunology, 2002.
5.Integrated view of?Vibrio?cholerae?in the Americas[J]. Science, 2017.
6.Detection, Isolation, and Identification of?Vibrio?cholerae?from the Environment[J]. Current protocols in Microbiology, 2012.
7.CTXφ Infection of?Vibrio?cholerae?Requires the?tolQRA?Gene Products[J], Journal of bacteriology, 2000.
8.Environmental reservoirs and mechanisms of persistence of?Vibrio?cholerae[J], Frontiers in Microbiology, 2013.
9.吳詩品. 霍亂: 不該被遺忘的老瘟疫 [J]. 新發(fā)傳染病電子雜志，2018.
10. 《全國霍亂監(jiān)測方案》（2017）.
11.霍亂弧菌檢測技術研究進展[J]. 微生物學報，2019.
